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Citometria de Massa: Uma Ferramenta  Adicional para Monitorar a Resposta Imune

Fonte: Science.

Na semana passada tivemos no NIH um workshop interessante sobre Monitoração da Resposta Imune. Um dos pontos discutidos foi o uso de novas ferramentas para essa avaliação que permitam a análise de grande número de marcadores com volumes de amostras relativamente pequenos. O pesquisador da Stanford University, Garry P. Nolan, mostrou os resultados que vem alcançando usando a Citometria de Massa.

A medida de parâmetros múltiplos numa única célula, utilizando-se citometria convencional é limitada pela sobreposição dos espectros de fluorescência dos fluoróforos. A imunofenotipagem por citometria de massa permite a análise de mais de 36 proteínas numa velocidade de 1000 células/segundo e sem a presença dessa sobreposição. Ao invés de fluorocromos, a citometria de massa usa metais raros da tabela periódica (lantanídeos) associados a anticorpos. As células passam individualmente através de um tubo, são pulverizadas dentro de uma câmara pequena, aquecidas a cerca de 13.000^oF e vaporizadas em nuvens sucessivas de núcleos atômicos e elétrons. Em seguida, o conteúdo de cada nuvem (que era uma célula) é arremessado contra uma parede. Um detector conta os átomos, enquanto eles aterrissam e assim, o instrumento pode determinar a massa de cada um deles.

Usando essa técnica, o grupo do Dr. Nolan examinou a medula óssea de indivíduos saudáveis, medindo simultaneamente 34 parâmetros para cada célula analisada (31 anticorpos, viabilidade, conteúdo de DNA e tamanho celular). Os dados foram publicados no ano passado na revista Science (Bendall et al., 2011). Embora a técnica tenha sido usada para analisar os processos de sinalização celular em vários tipos celulares do sistema hematopoiético humano, pode ser aplicada também para vários outros sistemas e, provavelmente, será uma metodologia utilizada com frequência pelos grupos de pesquisa futuramente.

Referências:

- Bendall SC, Nolan GP, Roederer M, Chattopadhyay PK. A deep profiler's guide to cytometry. Trends Immunol. 2012 Apr 2.

- Nolan GP. Flow cytometry in the post fluorescence era. Best Pract Res Clin Haematol. 2011.

- Bendall SC, Simonds EF, Qiu P, Amir ED, Krutzik PO, Finck R, Bruggner RV, Melamed R,  Trejo A, Ornatsky OI, Balderas RS, Plevritis SK, Sachs K, Pe’er D, Tanner SD, Nolan GP. Single-cell mass cytometry of differential immune and drug responses across a human hematopoietic continuum. Science 332, 687–696 (2011).