Avaliação da qualidade de células T por citometria multiparamétrica

“Repousar é preciso"

A citometria de fluxo é uma tecnologia poderosa, capaz de quantificar as funções individuais de forma independente e simultaneamente em uma única célula. A quantificação de múltiplas funções de células T requer, pelo menos, a tecnologia de seis cores: três cores para identificar a linhagem de células T (basicamente por marcadores como CD3, CD4 e CD8) e as outras cores para identificação das funções efetoras de interesse. Para distinguir os estágios de diferenciação de células T, alguns artigos ultimamente têm demonstrado uma forma diferente de análise dos dados, chamada de citometria multiparamétrica.                                

Seder e col. demonstraram que o grau de proteção contra a infecção por Leishmania major em camundongos é determinada pela frequência de células T CD4⁺ que produzem simultaneamente, IFN-g, TNF e IL-2. Essas células são chamadas de multifuncionais e são identificadas pela citometria multiparamétrica. Esses autores concluem que a eficiência da vacina está relacionada com a qualidade da resposta Th1 através de uma alta frequência de células multifuncionais.

Em uma proposta ousada, utilizando somente análise multiparamétrica, Kutscher e col. propõem que PBMC precisam “repousar”, para funcionarem de forma mais eficiente em resposta à antígenos vacinais. Nesse artigo, os autores propõem que 18 h de repouso seriam necessárias para observarmos um aumento de células T CD8 multifuncionais produtoras de IFN-g, TNF-a e IL-2 contra os antígenos virais em células de pacientes com HIV, HCV, HBV, CMV. Portanto a resposta multiparamétrica de células CD8 produtoras de IFN-g, TNF-a e IL-2 seria efetiva no combate a esses patógenos.  Os resultados concluem que o “repouso” interfere diretamente na resposta observada para os antígenos analisados, demostrando um aumento na sensibilidade do ensaio funcional de células T, observado pela análise multiparamétrica.

Referências:

Patricia A Darra, Dipti T Patel, Paula M De Luca, Ross W B Lindsay, Dylan F Davey, Barbara J Flynn, Søren T Hoff, Peter Andersen, Steven G Reed, Sheldon L Morris, Mario Roederer & Robert A Seder. Multifunctional TH1 cells define a correlate of vaccine mediated protection against Leishmania major, Nature Medicine, 2007, doi:10.1038/nm1592

Robert A. Seder, Patricia A. Darrah and Mario Roederer T-cell quality in memory and protection: implications for vaccine design. Nature Reviews-Immunology, 2008, doi:10.1038/nri2274

Kutscher S1, Dembek CJ, Deckert S, Russo C, Körber N, Bogner JR, Geisler F, Umgelter A, Neuenhahn M, Albrecht J, Cosma A, Protzer U, Bauer T. Overnight resting of PBMC changes functional signatures of antigen specific T- cell responses: impact for immune monitoring within clinical trials. PLoS One. 2013 Oct 11;8(10):e76215. doi: 10.1371

Cristiani Bani, Patricia S. Marques de Souza e Roque Almeida